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szaia_test@vip.163.com3月10日,国务院应对新型冠状病毒肺炎疫情联防联控机制综合组发布《新冠病毒抗原检测应用方案(试行)》,允许社区居民可通过零售药店、网络销售平台等渠道自行购买新冠抗原检测试剂进行自测。为了帮助市民正确认识新冠病毒抗原检测方法,本文先聊聊新冠病毒的3种最常见的快速检测方法。
新冠病毒(SARS-CoV-2)是一种由蛋白包裹的正向单链RNA病毒。新冠病毒感染人体后,会在鼻腔、咽部、下呼吸道等处“定居”并进行繁殖,通过采集鼻咽拭子、痰液、血液等标本进行相关因子检测,可以判断人体是否感染了新冠病毒。直接分离病原体是传染性疾病检测的金标准,新冠病毒分离培养需要在生物安全防护极高的P3实验室进行,且需要经国家卫健委批准备案,各省的P3实验室均凤毛麟角。
疫情当下,为尽可能的减少新冠病毒的传播,适用于大规模快速检测的方法成为社会所需。按照检测靶标区分,新冠病毒的快速检测方法包括3种:核酸检测、抗原检测和抗体检测。目前市民在社区及医院接受的新冠病毒检测大多是核酸快速检测。
一、新冠病毒核酸快速检测方法
目前最主要新冠病毒核酸快速检测方法是逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR法)。原理是将新冠病毒的RNA基因通过逆转录酶转化合成为体外较为稳定的DNA,然后在DNA聚合酶作用下借助引物特异性识别新冠病毒的基因序列,复制出特异的DNA序列,DNA聚合酶每次反应一次,特异的DNA片断增加一倍,经过a个(大约15-40个)循环反应,会产2ª倍数量特异的DNA片断,并产生特定仪器(名为实时荧光PCR仪,30-70万元/台)可以检测出的足量荧光信号。由于每个感染人体样本中新冠病毒数量不等,RNA基因数量不一样,循环次数a也不一样,实验室称为Ct值。Ct值一般在15-40之间,越低表示人体样本中新冠病毒数量越多,越容易最快检出。
新冠病毒核酸快速检测方法采集样本多为受检者的咽部擦拭拭子,需要专业基因实验室在严格的实验环境条件下进行。
二、新冠病毒抗原快速检测方法
抗原检测就是针对新冠病毒的包膜蛋白进行检测。新冠病毒包膜有四种主要的结构蛋白:S蛋白、N蛋白、M蛋白和E蛋白。人体感染新冠病毒后,这些蛋白就会刺激我们的身体产生特异抗体。目前已经批准的抗原检测产品,多是以新冠病毒N蛋白作为检测靶标。检测抗原最方便使用的快速检测方法为免疫胶体金法,与早孕试纸条接近。这种试纸经过特殊标记,上面有孔,用于滴入受检者经过简单处理的液体样本。免疫胶体金试纸上面有2条线,一条叫做检测线,另一条叫做质量控制线,如果两条线都显色,代表阳性;只有质控线显色,代表阴性;出现这两种情况之外的情况,属于无效结果。
采用免疫胶体金试纸检测抗原时,采集样本多为受检者的鼻部擦拭拭子,对检测环境条件没有要求,也不需要专业昂贵的仪器,市民可以自行操作。
三、新冠病毒抗体快速检测方法
人体感染新冠病毒后,外膜结构蛋白就会刺激我们的身体产生特异抗体,分为IgM或IgG二类抗体,IgM抗体出现较早,IgG抗体出现较晚。最方便使用的快速检测方法仍为免疫胶体金法,实验室也常用更加灵敏可靠的化学免疫发光法,但用时较长、专业要求高。
检测抗体采集样本多为受检者的血清,对环境条件没有特别要求,但需要专业人员采集血液,不建议市民自行操作免疫胶体金法检测抗体。
四、新冠病毒3类快速检测方法的比较
表1.新冠病毒三种快速检测方法的比较
比较项 | 核酸检测 | 抗原检测 | 抗体检测 |
检测样本 | 鼻咽拭子、痰液或肺泡灌洗液 | 鼻咽拭子、痰液或肺泡灌洗液 | 血清或血浆 |
检测靶标 | 基因:RdRp、Orf1ab、E、N、S | 结构蛋白:S、N、M和E | 抗体:IgM、IgG |
检测 窗口期 | 感染初期至康复后机体消灭病毒 | 感染初期至康复后机体消灭病毒 | 机体感染新冠病毒5-14天 |
检测时间 | 2-4小时 | 15分钟内 | 15分钟内 |
检测环境 | 需要至少生物安全 2 级(BSL-2)实验室 | 无特殊要求 | 无特殊要求 |
优缺点 | 优点:灵敏度高、特异性高; 缺点:需要至少生物安全 2 级(BSL-2)实验室、专业设备和经过培训的实验人员,而且操作过程比较繁琐。 | 优点:操作简便、快捷和成本低等,对环境要求不高; 缺点:存在低含量病毒样本可能无法检测,最好使用核酸检测方法复核确认,避免误判。 | 优点:操作简便、快捷和成本低等,对环境要求不高; 缺点:不适用于感染初期检测,有一定的误判率,准确性上相对不够好。 |
本文聊完新冠病毒最常见的3种快速检测方法后,下一篇将讲述什么情况才适合采用新冠病毒抗原快速检测方法进行人群筛查,请大家略候。